Усовершенствованный метод исследования лейкоза у КРС

Усовершенствованный метод исследования лейкоза у КРС

Открытие вирусной природы лейкозов крупного рогатого скота позволила предложить практике меры по формированию стад, свободных от лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС). Это достигается выявлением животных вирусоносителей. Лейкоз КРС хроническая инфекционная болезнь опухолевой природы вызываемая вирусом лейкоза, протекающая бессимптомно или проявляющаяся лимфоцитозом или образованием опухолей в кроветворных и других органах и тканях. Основы первичной диагностики лейкоза КРС в лабораторных условиях составляет серологический метод исследования – реакция иммунной диффузии (РИД) в сыворотке крови животных специфических антител к вирусу лейкоза КРС.

Для постановки РИД требуется определенный набор оборудования, в состав которого и входит штамп-пробойник для прорезания лунок в тест-системе затвердевшем агаровом геле, предварительно разлитом чашки Петри, установленное в горизонтальном положении. Для каждой тест-системы требуется семь лунок диаметром 5-7 мм одна в центре и шесть по периферии, расстояние между лунками соответствуют 2.5-3 мм. Имеется 2 вида резинового пробойника: на 5 и на 7 тест-систем. В соответствии с методикой и использованием для диагностики стандартных чашек Петри, в которых помещается 7 тест-систем, т.е. 49 лунок возможно исследование сыворотки крови от 28 голов КРС. Резиновый пробойник на 5 тест-систем, позволяет исследовать 20 голов КРС.

Образовавшиеся при этом агаровые пробки удаляют из лунки с помощью водоструйного насоса или кровобрательной иглой. Тщательность удаления агаровой пробки из лунки определяется визуально при ярком освещении лампой.

При воздействии на слой агарового геля пробойником и струей воды он может отслоится от дна чашки т.е. приподняться, что недопустимо т.к. реагенты могут затечь под слой агарового геля. Для обеспечения плотного прилежания агарового геля к чашке после удаления пробок из лунок чашки подогревают в сушильном шкафу. После этого лунки заполняют соответствующим образом пробами крови и необходимыми реагентами и проводят исследование крови КРС. Одна тест-система соответствующий 7-лунком, где возможно исследовать сыворотки крови от четырех голов. На исследование 250 проб сыворотки крови от животных при использование металлического штамп-пробойник, затрачивается 4 часа 30 минут.
Основной недостаток используемого пробойника заключается в трудоемкости нанесения лунок на агаровый гель. Необходимо нанести 7-тест –систем. Тщательность обработки лунок от пробок агарового геля и требует визуального напряжения специалиста и вносит некоторую субъективность и как следствие неточность в анализе. В диагностическом наборе оборудования нужно иметь водоструйный насос, сушильный шкаф, светильник, что усложняет и без того не простое исследование.

Нами проведено усовершенствование штампа-пробойника с целью одновременного нанесения необходимого количества лунок без осуществления их очистки.

Для этого известный пробойник, включающий основание с расположением на нем лункообразователями, диаметр расположения который соответствует расположению лунок в схеме одной тест системы, выполнен из эластичной резины, диаметром основания которого соответствуют диаметру чашек Петри, а количество и расположение лункообразователей выполненных в виде 49-стержней соответствуют количеству и расположению лунок 7-тест-систем.

Исполнение лункообразователей в виде резиновых стержней позволяют формировать лунки, помещая пробойник в жидкий агаровый гель. По мере затвердевания агарового геля не сцепляется с резиновой поверхностью стержней. Легко вынув пробойник из агарового слоя сразу получаем готовые лунки не требующее дополнительной очистки. При этом агаровый слой не отходит от дна чашки и потому не требуется его дополнительный подогрев в сушильном шкафу. На исследование 250 проб сыворотки крови затрачивается 1-час.

Пробойник состоит из основания на котором с одной стороны размещены стержни, а с ругой стороны ручки для удобства обращения с ним.

Штамп-пробойник, содержащий, стержней соответствующих количеству лунок тест-систем помещают в расплавленный агаровый слой чашки Петри. В зависимости от температуры в помещении агаровый слой затвердевает в течение 30-60 мин. После этого пробойник удаляют, а агаровый слой с лунками далее используют для анализа сыворотки крови 28 голов КРС. Экспериментально были установлены оптимальный вид материала, и высота стержня при которых не отслаивается агаровый слой от дна чашек и не происходит его прилипание к поверхности выступов. Для серологической диагностики лейкоза КРС оптимальным оказался пробойник, изготовленный из эластичной резины.

Таким образом замена металла ,как материала для изготовления штампа –пробойника на резину позволила изготовить штамп–пробойник для одновременного нанесения 7-тест систем на чашку Петри, исключить субъективный фактор в оценке качества получаемых лунок упростить набор оборудования для диагностики исключив из него светильник, сушильный шкаф, водоструйный насос и тем самым значительно упростить диагностику в целом и повысить ее достоверность.
За 4 часа 30 минут металлическим пробойником можно приготовить агаровый гель для исследования 250 голов КРС, а при замене его резиновый можно приготовить агаровый гель для исследования более одной тысячи голов КРС